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1.將苯酚紅溶于冰乙酸，攪拌下加入溴溶于冰乙酸的溶液，攪拌幾分鐘后傾入60℃熱水中，冷卻至室溫，放置過夜。過濾，依次用冰乙酸、苯洗滌濾餅，晾干，得溴酚藍。

2.將酚紅溶于冰乙酸中，加熱至沸，滴加溴溶于冰乙酸中的溶液，黃色固體析出時，過濾，用乙酸洗去游離溴，置于空氣中干燥后即得粗品。用冰乙酸或丙酮與冰乙酸混合溶劑重結晶，得純品溴酚藍。

3.將酚紅和溴分別溶于醋酸中，制成溶液。先將酚紅醋酸溶液加熱至沸，然后在攪拌下緩慢加入溴的醋酸溶液：當酚紅反應*且黃色晶體不再析出后，冷卻，過濾。用少量醋酸洗去結晶中的游離溴后，用醋酸或丙酮 醋酸進行重結晶，在空氣中干燥得純品溴酚藍。

配置溴酚藍指示液。用途：變色范圍：pH2.8-4.6（黃-藍），酸堿指示劑；非水滴定用指示劑，蛋白電泳染色；病毒化驗等 ^[3]  。

將托盤天平上稱取1g溴酚藍定溶于100ml無水乙醇中，轉移入滴瓶中，貼標簽備用。

配western blot用的2*SDS上樣緩沖液需要用到0.1%的溴酚藍，2-DE中溴酚藍一般也是配成0.1%母液。實際上，溴酚藍在水中的溶解度不高，直接將0.1g溴酚藍溶于100ml水是有困難的。下面是其較合適的配制方法：

0.05%的溴酚藍配制方法：取溴酚藍0.1g，加0.05mol/L*溶液3.0ml使溶解，再加水稀釋至200ml，即得。 變色范圍pH2.8～4.6（黃→藍綠）。只是不知道加入NaOH會不會影響2-DE實驗。估計影響不大，因為指示劑用量畢竟很少。

加水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到*溶解。溴酚藍其鈉鹽易溶解在水里。溴酚藍試紙